RIPA细胞裂解液（强）

产品名称:   RIPA细胞裂解液（强）
产品货号:   AR034125
包装规格:   125 ml     单位：瓶      性状：液体

产品信息:
RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可以分为强、中、弱三类，具体特点和差异请参考说明书附表1，可根据具体实验需求选择相应产品。
RIPA裂解液（强）的主要成分为50mM Tris(pH 7.4), 150mM NaCl, 1%Triton X-100, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS以及leupeptin, sodium fluoride, sodium orthovanadate, EDTA等。
RIPA裂解液（强）对胞浆蛋白、膜蛋白和核蛋白提取效果很好。提取的蛋白后续可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。

使用说明：
A. 贴壁细胞蛋白抽提
1．小心倾去贴壁细胞的培养液。
2．使用预冷的1×PBS或者1×TBS缓冲液漂洗细胞一遍。
3．加入适量RIPA Lysis Buffer（使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂，裂解液使用量请参考说明书附表2），在冰上用枪头吹打贴壁细胞。
4．将裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
5．4℃, 13000rpm离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
B. 悬浮细胞蛋白提取
1．取适量悬浮细胞，1500rpm离心3分钟，弃去上清。
2．使用预冷的1×PBS或者1×TBS缓冲液漂洗细胞一遍。漂洗后的细胞悬浮液1500rpm离心3分钟，弃去上清。
3．加入适量RIPA Lysis Buffer（使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂），每5×106细胞加入约200-500 µl RIPA Lysis Buffer，吹打均匀。冰上放置20分钟，使细胞充分裂解。
4．4℃, 13000rpm离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
C. 组织样品
1．取适当的RIPA Lysis Buffer，在使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂。
2．称量实验组织的重量，按照1:10（g/ml）的比例加入RIPA Lysis Buffer后将组织剪成细小碎片，用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
3．4℃, 13000rpm离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

保存方法:
4℃ 保存，一年有效。

注意事项：
1．为防止蛋白降解，所使用的buffer需要提前预冷，所有的操作尽量在冰上进行。
2．使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，以测定蛋白浓度。
本品含有高浓度的去垢剂，不能用Bradford法进行蛋白定量。
3．建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，以防止蛋
白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。
4．RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为基因组。